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1項目需求書一、項目概況采購人作為集醫(yī)療、科研、教學于一體的綜合性醫(yī)院，核心使命在于攻克臨床疑難疾病、優(yōu)化診療方案、促進基礎(chǔ)研究向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。當前，眾多重大疾病（如腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、自身免疫病等）的發(fā)病機制尚未完全闡明，傳統(tǒng)診療手段在“早期診斷”、“精準分型”及“靶向治療”等方面仍存在顯著局限。本次擬申購的技術(shù)服務(wù)，聚焦于“解析疾病分子機制、開發(fā)新型診斷方法、驗證靶向治療效果”三大核心方向，旨在依托前沿技術(shù)平臺，驅(qū)動臨床研究取得突破性進展，最終實現(xiàn)診療水平的整體躍升，惠及廣大患者。二、技術(shù)要求（一）單細胞測序技術(shù)服務(wù)1、平臺與設(shè)備要求：支持單細胞轉(zhuǎn)錄組、ATAC-seq等多維度分析，單次實驗可處理樣本量≥8個，細胞捕獲效率≥65%。2、樣本處理要求：支持新鮮組織、凍存細胞、FFPE樣本等多種類型，細胞活性檢測需采用CountstarRigel全自動細胞計數(shù)儀，確保細胞活性≥85%（復雜樣本≥75%），無細胞團塊污染（團塊率≤5%）。3、數(shù)據(jù)質(zhì)量標準：測序數(shù)據(jù)量≥150G/樣本，Q30≥90%，UMI檢測數(shù)≥5000/細胞，基因檢測數(shù)≥3000/細胞；數(shù)據(jù)分析需包含細胞分群、差異基因分析、擬時序分析等基礎(chǔ)模塊，同時支持定制化分析（如腫瘤微環(huán)境細胞互作、免疫細胞克隆型分析），需提供可視化報告（含t-SNE/UMAP圖、熱圖等）。4、項目團隊要求：技術(shù)負責人需具備5年以上單細胞測序經(jīng)驗。（二）空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)服務(wù)1、平臺要求：支持5μm以下分辨率（VisiumHD平臺達2μm），芯片捕獲面積≥65×65mm（滿足大組織樣本需求）。22、樣本與數(shù)據(jù)要求：支持冰凍切片、FFPE切片（需提供脫蠟優(yōu)化方案），切片厚度5-10μm，無褶皺/脫片；測序數(shù)據(jù)量≥200G/樣本，基因檢出率≥15,000個/芯片，需完成空間位置與基因表達的關(guān)聯(lián)分析，提供“基因表達熱圖+組織HE染色疊加圖”，支持區(qū)域特異性基因篩選（需標注P值≤001）。3、整合分析能力：需具備單細胞轉(zhuǎn)錄組與空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)整合分析能力，可實現(xiàn)“單細胞亞群空間定位”“區(qū)域細胞異質(zhì)性量化”等高級分析，交付周期≤35個工作日（從樣本接收起算）。（三）動物核磁技術(shù)服務(wù)1、設(shè)備標準：需合作實驗室配備94T及以上小動物核磁共振系統(tǒng)，需提供設(shè)備使用授權(quán)證明；支持T1WI、T2WI、DWI等常規(guī)序列，以及擴散張量成像（DTI）、磁共振波譜（MRS）等功能序列，空間分辨率≤50μm（體素大小≤005mm3）。2、實驗要求：支持小鼠、大鼠等常見模式動物，提供標準化麻醉（異氟烷吸入）與生命體征監(jiān)測（體溫、呼吸實時記錄）；樣本處理需符合AAALAC動物倫理認證要求；成像數(shù)據(jù)需經(jīng)Paravision360軟件分析，交付量化指標（如病灶體積、ADC值、代謝物濃度等）。3、服務(wù)保障：需配備專職動物實驗技術(shù)員，實驗前提供方案優(yōu)化建議（如樣本數(shù)量統(tǒng)計、掃描參數(shù)設(shè)置），實驗周期≤7個工作日/批次（含數(shù)據(jù)分析）。（四）Angiopep2多肽修飾脂質(zhì)LNP包裹siRNA項目1、多肽合成要求：Angiopep2多肽需采用固相合成法，純度≥95%（HPLC檢測，提供檢測報告），分子量誤差≤01%（MALDI-TOF驗證），無內(nèi)毒素污染（≤01EU/mg）；可提供合成工藝優(yōu)化方案（如二硫鍵穩(wěn)定化修飾），確保多肽穩(wěn)定性（4℃儲存≥6個月）。2、LNP制備與表征：LNP需采用微流控技術(shù)制備，粒徑分布PDI≤015（動態(tài)光散射儀檢測），平均粒徑100-150nm，zeta電位-10~+5mV；siRNA包封率≥390%（熒光淬滅法檢測），無游離siRNA（PAGE電泳驗證）。3、功能驗證要求：需提供體外細胞攝取實驗（熒光標記LNP，流式細胞術(shù)檢測攝取率≥80%）、血腦屏障穿透性模擬實驗（Transwell模型，穿透率≥30%），支持客戶指定細胞系的沉默效率檢測（qPCR驗證靶基因沉默率≥70%）。（五）TTBK1SiRNA制取服務(wù)1、序列設(shè)計與合成：需基于NCBI數(shù)據(jù)庫（最新版本）設(shè)計3條以上候選siRNA序列，采用BLAST比對確保無脫靶（同源性≤15%）；合成需采用PAGE純化，純度≥98%（HPLC檢測），2-O-甲基修飾（提升穩(wěn)定性），提供序列比對報告與修飾位點說明。2、活性驗證：需在客戶指定細胞系（如HEK293T）中完成活性篩選，采用qPCR與Westernblot雙重驗證（至少1條序列沉默率≥80%），提供3次重復實驗數(shù)據(jù)（CV值≤10%）；siRNA需分裝保存（-80℃，10nmol/管），附帶復溶說明與穩(wěn)定性報告（-20℃儲存≥12個月）。（六）多色熒光成像技術(shù)服務(wù)1、設(shè)備與參數(shù)：熒光通道≥5個（405/488/555/594/647nm），分辨率≤023μm/pixel，支持自動聚焦與大視野拼圖（最大拼圖尺寸≥10×10cm）。2、樣本與成像要求：支持冰凍切片、石蠟切片、細胞爬片等，可處理多色標記樣本（如免疫熒光三標及以上），熒光信號信噪比≥30:1，無串色（串色率≤5%）；成像數(shù)據(jù)需提供原始格式（czi）與分析格式（tiff），支持ImageJ、QuPath等軟件分析，交付周期≤3個工作日/20片樣本。（七）活細胞長時程多色熒光實驗1、設(shè)備與環(huán)境控制：需采用活細胞成像系統(tǒng)，配備CO?培養(yǎng)箱（濃度控制5%±01%）、溫控模塊（37℃±05℃）、防蒸發(fā)系統(tǒng)，支持96孔板全自動掃描；熒光通道≥4個，支持長時間曝光（≥72小時連續(xù)觀測，無焦點漂移）。42、實驗要求：可實現(xiàn)單細胞動態(tài)追蹤（追蹤精度≤2μm），記錄細胞增殖、遷移、凋亡等動態(tài)過程；提供實驗方案優(yōu)化（如熒光探針濃度、拍攝間隔），避免光毒性（細胞存活率≥80%，與對照組無顯著差異）；數(shù)據(jù)分析需包含細胞運動軌跡圖、增殖速率統(tǒng)計、熒光強度變化曲線等。（八）超高分辨成像實驗1、設(shè)備標準：支持Airyscan2模式，橫向分辨率≤120nm，軸向分辨率≤350nm，支持405-647nm多波長激發(fā)，可實現(xiàn)活細胞超分辨成像（無損傷模式）。2、樣本與數(shù)據(jù)要求：支持固定樣本（如免疫電鏡樣本）與活細胞樣本，提供樣本制備指導（如抗體稀釋比例、染色時間）；成像數(shù)據(jù)需包含原始圖與超分辨重建圖，支持三維重構(gòu)（Z軸步進≤100nm），交付數(shù)據(jù)需通過蔡司Zen軟件質(zhì)量驗證（分辨率達標證明）。（九）透明化樣品成像1、技術(shù)流程：需采用CLARITY或uDISCO透明化技術(shù)，支持小鼠全腦、器官組織（如脊髓、DRG）透明化處理，處理周期≤14天（全腦樣本），透明化后樣本透光率≥90%（500-700nm波長），無組織收縮（體積變化率≤5%）。2、成像與分析：需結(jié)合光片顯微鏡成像，三維分辨率≤5μm，支持大樣本拼接（拼接誤差≤1%）；數(shù)據(jù)分析需包含三維結(jié)構(gòu)渲染、區(qū)域體積統(tǒng)計、熒光信號定量，可導出3D模型（stl格式）用于后續(xù)研究。（十）整體組織樣品三維低損成像1、低損處理要求：需采用無切片、非侵入性處理技術(shù)，避免組織損傷（如機械切割、化學腐蝕），樣本完整性≥95%（HE染色驗證結(jié)構(gòu)完整）；支持直徑≤1cm的組織樣本（如腫瘤組織、淋巴結(jié)）。2、成像參數(shù)：需采用X射線顯微成像或光片成像技術(shù)，三維分辨率≤10μm，成像速度≥1mm3/小時，支持多模態(tài)融合（如結(jié)構(gòu)成像+熒光標記成像）；交付數(shù)